【課程大綱】四平2020版《中國藥典》醫療器械無菌微生物檢驗員
Ⅱ 、Ⅲ類醫療器械企業無菌檢 (化) 驗人員，醫用口罩檢驗人員；體 外診斷試劑企業微生物檢驗員，潔凈環境檢測人員等。根據《醫療器 械生產企業許可證現場審查標準》和《醫療器械生產企業監督檢查計 劃》，每個企業應有 2 名以上專職檢驗人員。
醫療器械產品進、出復核制度
制度內容的基本要求:
1.庫房管-理-員憑驗收人員簽章的入庫憑證辦理入庫手續。
2.入庫產品必須及時登帳，有序存放，設置明顯標識，做到帳物卡相符。
3.庫房管-理-員必須憑出庫憑證辦理出庫手續，對出庫的產品要根據出庫憑證所列項目逐項進行復核，并做好記錄。
4.產品出庫應做到先進先出、近期先出、按批次出庫。
5.產品出入庫要有雙人簽字。一、無菌檢驗員培訓目的
1. 醫療器械口罩防護用品行業標準微生物檢驗方法；
2. 產品的無菌檢驗方法、培養基適用性檢查及產品方法適用性試驗；
3. 初始污染菌檢驗方法、計數培養基適用性檢查及產品修正系數；
4. 純化水微生物限度檢驗及所有培養基適用性檢查；
5. 潔凈間監測方法及問題解析；
6. 不同供試品的制備方法；
7. 實驗所有菌種保藏、管理、傳代和使用技術；
增加的內容 如：將資源管理中，第七條和第八條人員要求，并入機構與人員； 第九條 生產企業應當具備并維護產品生產所需的生產場地、生產設備、監視和測量裝置、倉儲場地等基礎設施以及工作環境。 分解為修訂版：廠房與設施7條（其中4條來自無菌細則），設備5條等硬件要求。
供應商的要求： 依據《醫療器械生產監督管理辦法》第四十六條，醫療器械生產企業應當加強采購管理，建立供應商審核制度，對供應商進行評價，確保采購產品符合法定要求。 第四十七條 醫療器械生產企業應當對原材料采購、生產、檢驗等過程進行記錄。記錄應當真實、準確、完整，并符合可追溯的要求。
第四十一條 企業應當建立供應商審核制度，并應當對供應商進行審核評價。必要時，應當進行現場審核。 第四十二條 企業應當與主要原材料供應商簽訂質量協議，明確雙方所承擔的質量責任。 總局2015年第1號通告 《醫療器械生產企業供應商審核指南》。
質量控制 第五十八條 生產企業應當根據強制性標準以及經注冊或者備案的產品技術要求制定產品的檢驗規程，并出具相應的檢驗報告或證書。(《條例》第二十四條） 需要常規控制的進貨檢驗、過程檢驗和產品檢驗項目原則上不得進行委托檢驗。對于檢驗條件和設備要求較高，確需委托檢驗的項目，可委托具有資質的機構進行檢驗，以證明產品符合強制性標準和經注冊或備案的產品技術要求。
二、無菌檢驗員培訓內容
1 、微生物基礎知識
1) 檢測實驗用培養基配制、滅菌；培養基、器具滅菌等相關問題詳講；
2) 查看大腸、銅綠、金葡各種培養基生長情況，三種菌劃平板
3) 供試液制備、細菌菌落、初始污染菌檢測；
4) 生產人員手、臺面、工作服菌落計數實驗操作；
5) 大腸桿菌檢測、綠膿桿菌及金黃色葡萄球菌檢測方法、操作步驟；
重點產品管理制度
醫療機構應對重點監控產品制訂有針對性的索證規范，向銷售人員索取身份證、企業法定代表人的委托授權書、一次性使用無菌醫療器械生產企業銷售人員登記表等復印件并驗明原件，以確認銷售人員身份及銷售權限與范圍。
醫療器械重點監測產品名單
一、一次性使用無菌醫療器械 1、一次性使用無菌注射器； 2、一次性使用輸液器； 3、一次性使用輸血器； 4、一次性使用滴定管式輸液器； 5、一次性使用靜脈輸液針； 6、一次性使用無菌注射針； 7、一次性使用塑料血袋； 8、一次性使用采血器； 9、一次性使用麻醉穿刺包； 10、其它形式一次性使用輸液器； 11、其它形式一次性使用注射器。
醫療器械重點監測產品名單
二、骨科植入物醫療器械 1、外科植入物關節假體； 2、金屬接骨、矯形釘； 3、金屬直型、異形接骨板； 4、金屬矯形用棒； 5、髓內針、骨針； 6、脊柱內固定器材； 7、骨修復材料（I，II）號。 三、填充材料 1、乳房填充材料； 2、人工鼻梁； 3、眼內填充材料（注：醫用透明質酸鈉）； 4、骨科填充材料。
三、無菌檢驗員培訓價格
初級1400元，中級1600元，高級1800元。
四、無菌檢驗員聯系老師
崔老師 1 8 5 2 0 4 5 7 6 6 0
樣品量 檢驗數量：是指一次試驗所用供試品最小包裝容器的數量。 檢驗量：指一次試驗所用的供試品總量。 除另有規定外，出廠產品按表 1規定；上市產品監督檢驗按表2、表 3規定。表1、表 2、表 3中最少檢驗數量不包括陽性對照試驗的供試品用量。（一般情況下，供試品無菌檢查若采用薄膜過濾法，應增加 1/2的最小檢驗數量作陽性對照用；若采用直接接種法，應增加供試品 1支（或瓶）作陽性對照用。）
實驗材料的準備 1、培養基及稀釋液 （1) 硫乙醇酸鹽流體培養基 （2）改良馬丁培養基 （3）pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液
2、培養基的制備及培養條件 直接購買配制好的干粉培養基，按培養基包裝上的說明，取規定量的干粉培養基及蒸餾水進行配制之后，按說明上的溫度、時間要求進行培養基滅菌。 注：對硫乙醇酸鹽流體培養基，配好后，須煮沸，再滅菌。培養基氧化層的高度不得超過培養基深度的1/5。 硫乙醇酸鹽流體培養基，置30～35℃培養。 改良馬丁培養基，置23～28℃培養。
3 、無菌基礎知識
1) 無菌檢查兩種實驗方法：直接接種法、薄膜過濾法
2) 純化水微生物限度檢測實驗
3) 查看斜面實驗結果；
4) 實驗總結；修正系數講解；培養基靈敏度；產品方法適用性實驗；
5) 菌種傳代與保存；
6) 微粒污染；潔凈環境監測。
影響假陰性發生的因素 1、培養條件不能支持微生物的生長（促生長試驗）； 2、在無菌實驗中，產品中釋放出了殺菌或微生物電解的物質（消除抑制物質） 3、從滅菌處理到培養有一定的時間間隔（確定滅菌后產品的儲存條件及儲存時間）
實驗過程中所用的記錄 1、培養基配制記錄 2、無菌檢驗原始記錄 3、滅菌設備、培養設備使用記錄 4、菌種使用記錄 5、培養基、陽性菌銷毀記錄 6、培養基靈敏度檢查記錄 7、無菌檢驗室消毒記錄 8、檢定菌接收、傳代登記表 9、冰箱溫度檢查記錄 10、無菌檢驗室溫濕度記錄 11、無菌檢驗室臭氧消毒記錄 12、無菌檢驗室紫外燈使用記錄 13、無菌工作服清洗消毒記錄 14、消毒劑配制記錄
實驗全過程中的注意事項 1、取樣 質檢人員要清楚樣品的來源，確保樣品具有代表性； 樣品包裝須完好無損，尤其是只有一層包裝的樣品。 2、實驗材料的準備 注意干粉培養基包裝瓶上所寫的滅菌溫度和時間； 硫乙醇酸鹽流體培養基必須在煮沸后，再進行分裝、滅菌； 無菌實驗的培養基最好現做現用。
將樣品及滅菌后的物品送入實驗室 進入無菌檢驗室的樣品若有兩層包裝的，需將外包裝在傳遞窗或緩沖間拆除后，傳入實驗室。 進入無菌操作室的所有培養基、供試品等的外表都應采用適用的方法進行消毒處理，以避免將外包裝污染的微生物帶入無菌檢驗室。例如：紫外燈照射不少于30min。 4、實驗操作階段 對不同種類和不同批次的產品，在拆包裝及夾取樣品時，應更換實驗用具； 用集菌儀進行薄膜過濾時，注意培養器的針頭部分不要污染。 5、廢棄物的處理 出具實驗結果后，所有培養物須經121℃高壓蒸汽滅菌30min的處理。
供試品的制備
創可貼供試品：將包裝好的創可貼打開，用剪刀將創可貼剪碎，放入100ml pH7.0氯化鈉—蛋白胨緩沖液中浸泡1小時，取水層作為供試品。
7.3. 試驗菌液的制備
7.3.1. 接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養物至營養瓊脂培養基斜面中,置30－35℃培養18-24小時，分別取用3-5ml 0.9％的無菌氯化鈉溶液，反復吹洗，沖下菌苔，震蕩80次，用10倍遞增稀釋制成每1ml含菌數小于100 CFU的菌懸液。
7.3.2. 接種生孢梭菌的新鮮培養物至12ml硫乙醇酸鹽流體培養基中,30～35℃培養18～24小時，取上述培養物1ml加9ml0.9%無菌氯化鈉溶液10倍遞增稀釋制成每1ml含菌數小于100 CFU的菌懸液。
7.3.3. 接種白色念珠菌的新鮮培養物至10ml改良馬丁培養基中，置23－28℃培養24-48小時，取上述培養物1ml加9ml 0.9％的無菌氯化鈉溶液10倍遞增稀釋制成每1ml含菌數小于100CFU的
菌懸液。
7.3.4. 接種黑曲霉的新鮮培養物至改良馬丁瓊脂斜面培養基中,置23-28℃培養5-7天，使大量孢子形成。用3-5ml0.9％的無菌氯化鈉溶液將孢子洗脫并過濾孢子懸液至無菌試管內作為原液，取1m原液加9ml 0.9％的無菌氯化鈉溶液10倍遞增逐級稀釋制成每1ml含孢子數小于100CFU的孢子懸液。
7.4.培養基靈敏度檢查
取每管裝量為12ml的硫乙醇酸鹽流體培養基9支，分別接種小于100 CFU的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌菌懸液各1ml，每種培養基各接種2支，另1支不接種作為空白對照，培養3天；取每管裝量為9ml的改良馬丁培養基5支，分別接種小于100 CFU的白色念珠菌、黑曲霉菌懸液各1ml，每種培養基各接種2支，另1支不接種作為空白對照，培養5天，逐日觀察結果。空白對照管無菌生長,加菌的培養基管均生長良好,判靈敏度檢查合格。
硫乙醇酸鹽流體培養基：
擬驗證的創可貼無菌檢查試驗方法
分別取創可貼供試品，加入相應的硫乙醇酸鹽流體培養基與改良馬丁培養基各100ml，細菌于30～35℃培養14天，真菌于23～28℃培養14天。同時每天觀察并記錄實驗結果。
7.6.驗證試驗的方法
7.6.1.將創可貼供試品分別人工污染小于100cfu的金黃色葡萄球菌、枯草桿菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌、黑曲霉、白色念株菌菌懸液后加入相應的硫乙醇酸鹽流體培養基與改良馬丁培養基各100ml，作為供試品陽性對照組；另分別取裝有同體積培養基的容器，加入等量試驗菌，作為陽性對照組；同時平行做緩沖液的陰性對照組。
7.6.2.細菌于30～35℃培養5天，真菌于23～28℃培養5天。每天觀察并記錄實驗結果。
7.7.可接受標準
陰性對照呈陰性，陽性對照呈陽性，供試品陽性對照組微生物生長情況與陽性對照組一致，說明創可貼按照《無菌檢查法標準操作規程》操作，供試品對微生物生長無不良影響，則創可貼的無菌檢查方法通過。
2020版《中國藥典》醫療器械無菌微生物檢驗員
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【講師介紹】1. 醫療器械口罩防護用品行業標準微生物檢驗方法；
2. 產品的無菌檢驗方法、培養基適用性檢查及產品方法適用性試驗；
3. 初始污染菌檢驗方法、計數培養基適用性檢查及產品修正系數；
4. 純化水微生物限度檢驗及所有培養基適用性檢查；
5. 潔凈間監測方法及問題解析；
6. 不同供試品的制備方法；
7. 實驗所有菌種保藏、管理、傳代和使用技術；
【培訓對象】Ⅱ 、Ⅲ類醫療器械企業無菌檢 (化) 驗人員，醫用口罩檢驗人員；體 外診斷試劑企業微生物檢驗員，潔凈環境檢測人員等。根據《醫療器 械生產企業許可證現場審查標準》和《醫療器械生產企業監督檢查計 劃》，每個企業應有 2 名以上專職檢驗人員。
更新時間：2024/10/16 8:20:28
